内容安排

第一天上午9:00-12:00  下午13:00-17:00

第一讲、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理

1、基因组靶向修饰技术发展简史（从基因打靶到基因编辑）   

2、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理        

第二讲、CRISPR的设计

1、CRISPR设计的依据及原则    2、常用CRISPR设计软件简介（CRISPR的在线设计简介）  3、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   

2、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送

实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1） CRISPR模板的制备

选做实验或参观：模式动物斑马鱼养殖条件规范（江苏省地方标准立项简介）/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第四讲、sgRNA活性验证

1、插入缺失（Indel）突变检测的基本策略  2、基于胚胎反应器的活性验证方法 3、基于细胞系的活性验证方法

实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、 转化、 携带基因组编辑工具的转化子的培养

选做实验或参观：斑马鱼胚胎显微注射/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第二天上午9:00-12:00     下午13:00-17:00

第五讲、利用CRISPR技术创制基因组编辑细胞系

1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析    2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）   3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认     4、基因编辑子的功能确认策略

实验三：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）  阳性转化子的快速验证法（PCR法）

实验四：基因组编辑子的基因型鉴定 （1）  基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增 

选做实验或参观：斑马鱼胚胎显微形态学观测/斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体（斑马鱼基因敲除突变体的制作）

1、RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵  2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的鉴定    3、基因组编辑突变体的筛选及建系（F1）  4、基因编辑子的功能确认策略  

实验五：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）    电泳确认

实验六：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定 （2）  电泳识别基因组编辑突变体

选做实验：斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定结果确认/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第七讲利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞或胚胎中的表达

1、dCas9的特征简介   2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程   3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化   5、碱基编辑技术   6、核酸检测

第八讲、斑马鱼模型在研究疾病发生机制中的运用

1、科学问题的提出    2、与疾病共分离的遗传突变的常见类型   3、评价人突变基因的斑马鱼模型的建立（CRISPRi法基因敲降法、CRISPR法基因敲除、或过表达）    4、斑马鱼模型表型模拟人类疾病临床特征（显微形态学、组织学、转录组学）     5、利用斑马鱼模型解析疾病发生机制研究的一般策略

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第九讲、CRSIPR/Cas9基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因    2、脱靶检测   3、解决脱靶问题的方法  4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

自由讨论：如何利用基因组编辑技术和斑马鱼模型回答关键科学问题、提前准备自然科学基金申请的前期研究工作基础。

第十讲 “基因编辑婴儿”事件及CRISPR技术的伦理学问题

1、 “基因编辑婴儿”事件    2、新型基因组编辑技术的发展   3、基因组编辑技术的应用  4、基因组编辑技术应用的伦理学问题