【课程安排】

第一天上午9:00-12:00  下午13:00-17:00

第一讲、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理

1、基因组靶向修饰技术发展简史（从基因打靶到基因编辑）   2、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理        

第二讲、CRISPR的设计

1、CRISPR设计的依据及原则    2、常用CRISPR设计软件简介（CRISPR的在线设计简介）   3、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   2、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送

实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1） CRISPR模板的制备

同时：自然科学基金申请书的写作心得（1）：如何提出关键科学问题（以解析人突变基因在疾病发生中的作用与机制为例）

第四讲、sgRNA活性验证

1、插入缺失（Indel）突变检测的基本策略  2、基于胚胎反应器的活性验证方法 3、基于细胞系的活性验证方法

实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、 转化、 携带基因组编辑工具的转化子的培养

同时：自然科学基金申请书的写作心得（2）：如何准备项目前期工作基础（支持科学假设的已有依据）

第二天上午9:00-12:00     下午13:00-17:00

第五讲、利用CRISPR技术创制基因组编辑细胞系

1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析    2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）   3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认      4、基因编辑子的功能确认策略

实验三：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）  阳性转化子的快速验证法（PCR法）

同时：自然科学基金申请书的写作心得（4）：如何撰写项目的立项依据

实验四：基因组编辑子的基因型鉴定 （1）  基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增 

同时：自然科学基金申请书的写作心得（3）：如何设置项目的研究内容、确定研究目标以及制定项目的研究方案

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体

1、RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵  2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的鉴定    3、基因组编辑突变体（F1）的筛选     4、建系（F2）  5、基因编辑子的功能确认策略   

第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌 和 细菌突变体

1、基因组编辑工具的制作  2、基因组编辑工具的递送  3、基因组编辑突变体（F1）的的筛选  4、建系（F2）   5、基因编辑子的功能确认

实验五：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）    电泳确认

实验六：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定 （2）  电泳识别基因组编辑突变体

同时：自然科学基金申请书的写作（5）：如何精心准备申请书的摘要、推敲申请书的题目及其它

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第八讲、CRSIPR/Cas9基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因    2、脱靶检测   3、解决脱靶问题的方法  4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

第九讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达

1、dCas9的特征简介   2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程   3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化   5、碱基编辑技术简介

第十讲、CRISPR技术的应用

1、 新型基因组编辑技术的发展   2、基因组编辑技术的应用  3、基因编辑子功能的研究策略简介（转录组学数据挖掘简介） 4、基因组编辑技术应用的伦理学问题